近期，隨著經(jīng)濟的復蘇，維生素類飼料添加劑銷售量大大增加，全球原料藥大制造商帝斯曼最近也宣布對飼料維生素A漲價6%，所以飼料中維生素A的檢測就顯得非常緊急和重要。

賽智科技參考國標（GB/T 17817-2010），利用全新高性能的LC-10Tvp高效液相色譜儀，經(jīng)實踐檢測可提供飼料中維生素A的HPLC檢測方案，得出的結果準確可靠，檢出限好，適用于配合飼料、濃縮飼料、復合預混合飼料、維生素預混合飼料中維生素A的測定，僅供廣大用戶參考。

以下是維生素A的測定的詳細檢測方法。

1　 儀器與試劑

1.1 儀器
　　LC-10Tvp高效液相色譜儀
　　Vertex 色譜柱：150mm×4.6mm×5μm；
　　分析天平，感量為分別為0.001g，0.0001g，0.00001g；
　　圓底燒瓶，帶回流冷凝器；
　　恒溫水浴鍋；
　　旋轉蒸發(fā)器；
　　超純水器。

1.2 試劑
　　無水乙醚：不含過氧化物；
　　無水乙醇；
　　正己烷，色譜純；
　　異丙醇，色譜純；
　　甲醇，色譜純；
　　2,6-二叔丁基對甲酚（BHT）；
　　無水硫酸鈉；
　　氮氣（純度99%）；
　　碘化鉀溶液；
　　淀粉指示液；
　　硫代硫酸鈉溶液；
　　氫氧化鉀溶液；
　　L-抗壞血酸純品；
　　酚酞指示劑；
　　1,4-二氧六環(huán)；
　　維生素A乙酸酯標準品：含量≥99%；
　　維生素A標準貯備液；
　　維生素A標準工作液。

2　 試樣溶液的制備

2.1 皂化
　　稱取試樣配合飼料或濃縮飼料適量，置入圓底燒瓶中，加L-壞血酸乙醇溶液，使試樣完全分散、浸濕，加氫氧化鉀溶液，混勻，置于水浴上回流，不時震蕩防止試樣粘附在瓶壁上，皂化結束，分別用無水乙醇、水自冷凝管頂端沖洗其內(nèi)部，取出燒瓶冷卻至40℃。

2.2 提取
　　定量轉移全部皂化液于盛有無水乙醚的分液漏斗中，用蒸餾水分2次~3次沖洗圓底燒瓶并入分液漏斗，加蓋、放氣，隨后混合，激烈震蕩，靜置、分層。轉移水相于第二個分液漏斗中，分次用乙醚重復提取兩次，棄去水相，合并三次乙醚相。用蒸餾水多次洗滌乙醚提取液至中性，初次水洗時輕輕旋搖，防止乳化。乙醚提取液通過無水硫酸鈉脫水，轉移到棕色容量瓶中，加BHT使之溶解，用乙醚定容至刻度。以上操作均在避光通風柜內(nèi)進行。

2.3 濃縮
　　從乙醚提取液中分取一定體積置于旋轉蒸發(fā)器燒瓶中，在水浴溫度約50℃，部分真空條件下蒸發(fā)至干或用氮氣吹干。殘渣用甲醇溶解并稀釋，離心或通過0.45μm過濾膜過濾，用于高效液相色譜儀分析。以上操作均在避光通風柜內(nèi)進行。

3　 色譜條件
　　色譜柱：Vertex 色譜柱　150mm×4.6mm×5μm；
　　流動相：甲醇+水=95+5；
　　流速：1.0mL/min；
　　溫度：室溫；
　　進樣量：20μL；
　　檢測波長：326nm。

4　 維生素A標準高效液相色譜圖。